BC - Dissertação

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Evaluación del potencial biotecnológico de hongos aislados de ambientes marinos
(2024-06-28) Osvaldo Manuel Nuñez Noguera; Marcela Boroski; Michel Rodrigo Zambrano Passarini; Orientação
El ambiente marino ha estado expuesto a una contaminación constante por compuestos derivados del petróleo, entre los cuales los hidrocarburos aromáticos policíclicos (HAPs) destacan por su alta toxicidad. Frente a este problema, se han propuesto métodos más sostenibles, como la biorremediación, para mitigar el impacto ambiental de los HAPs en diversos ecosistemas. En este contexto, se evaluó el potencial de hongos marinos para biodegradar compuestos derivados del petróleo. Estos hongos fueron recolectados en las costas de los estados de Paraná y Santa Catarina (Brasil) y se encontraban conservados en los laboratorios de biotecnología ambiental de la Universidad Federal de la Integración Latinoamericana (UNILA). Se reactivaron 16 hongos, las cuales fueron sometidas a ensayos de selección. En la prueba de decoloración del tinte Remazol Brilliant Blue R (RBBR) a 500 mg L⁻¹, se alcanzó la decoloración del 30 - 90% con los hogos FM02, FM14, FM16, FM12 y FM13. En cuanto a la tolerancia al óleo diésel (2% v/v) y al pireno (50 mg L⁻¹), se observó una tasa de crecimiento significativa, con valores de 0,04 a 0,16 g mL⁻¹ para pireno y de 0,03 a 0,06 g mL⁻¹ con diésel, siendo estas las únicas fuentes de carbono disponibles. En la producción de biosurfactantes, solo el hongo FM14 destacó, con un índice de emulsificación del 17,5%. Se seleccionaron tres hongos (FM02, FM14 y FM16) para evaluar la degradación de pireno, utilizando cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) para la cuantificación. A partir de una concentración inicial de 66,7 mg L⁻¹ de pireno, se observó la degradación del 34,48% (FM02), 39,40% (FM14) y 50,31% (FM16) tras 8 días de incubación. El hongo FM16 mostró el mayor rendimiento en la degradación de pireno, convirtiéndolo en un candidato prometedor para futuros estudios. La optimización de las condiciones de cultivo pudría potenciar aún más su eficiencia y viabilidad a gran escala.
Desenvolvimento do ensaio qualitativo por amplificação isotérmica mediada por Loop (LAMP) para diagnóstico de leishmaniose visceral canina.
(2024) Barcellos, Ema Carolina Almeida
A Leishmaniose Visceral Canina (LVC) é uma zoonose transmitida através da picada de flebotomíneos infectados pelo protozoário do gênero Leishmania da família Trypanosomatidae e representa uma preocupação significativa para a saúde pública em áreas endêmicas. Este estudo teve como objetivo desenvolver um ensaio qualitativo para a detecção de Leishmaniose Visceral Canina por meio da reação isotérmica mediada por loop (LAMP). Considerando amostras de sangue de 53 cães sintomáticos, o ensaio foi padronizado utilizando um protocolo pré-estabelecido e comparado com a técnica molecular padrão ouro (qPCR). Durante o processo de padronização, identificaram-se desafios relacionados à reprodutibilidade, fenômeno amplamente documentado na literatura científica, estes desafios foram enfrentados através da implementação de práticas laboratoriais apropriadas. Apesar dos desafios, os resultados destacam o potencial do método LAMP como uma abordagem eficaz e precisa para o diagnóstico de cães sintomáticos, contribuindo para o controle da Leishmaniose Visceral Canina e prevenção da transmissão zoonótica. A análise revelou que o método LAMP evidenciou uma sensibilidade de 100% (IC 95%) e especificidade de 100% (IC 95%) para amostras de sangue. A análise da Curva ROC reforçou a capacidade do LAMP em distinguir entre cães com Leishmaniose Visceral Canina e controles saudáveis, consolidando sua eficácia como uma ferramenta diagnóstica confiável.
Desarrollo de un paquete tecnológico de monitoreo ambiental de peces basado en eDNA metabarcoding.
(2024) Cadena Mantilla, Diego Fernando
Secuenciar y analizar el ADN ha revolucionado la conservación y el monitoreo de la biodiversidad. Técnicas como el DNA barcoding y la metagenómica permiten la identificación de especies a partir de muestras ambientales sin requerir observación directa o cultivo en laboratorio. Estas técnicas son cruciales para detectar especies raras, invasoras o en peligro, y para evaluar la efectividad de las acciones de conservación mediante el seguimiento pre y post-intervención. El eDNA metabarcoding se destaca como una herramienta eficaz para la identificación de especies de peces utilizando el marcador molecular 12S. A pesar de sus ventajas, enfrenta desafíos como la ausencia de parámetros estandarizados y la falta de bases de datos completas. Este estudio desarrolló un protocolo optimizado de eDNA metabarcoding para monitorear peces en arroyos, superando problemas relacionados con el volumen de agua y el almacenamiento de muestras. Establecimos que filtrar 1.2 litros de agua, en dos etapas, a través de membranas de 0.70 y 0.45 µm es óptimo para recuperar comunidades de peces. El marcador NeoFish demostró una mejor resolución taxonómica, identificando un mayor número de especies con una alta coincidencia respecto a los estudios tradicionales. Sin embargo, la carencia de secuencias referencia para muchas especies neotropicales limita la precisión del método. Asi, se creó un banco de datos con secuencias de 46 nuevas especies para actualizar los registros globales, a partir del diseño de dos nuevos cebadores Forward y un cebador Reverse para el secuenciamiento de las secuencias 12S referencia enfocado en la ictiofauna regional. El eDNA metabarcoding reveló un mayor número de especies en comparación con los métodos tradicionales, aunque no todas las especies fueron identificadas, con mayor resolución con el banco de datos creado. Ambos métodos coincidieron en la identificación de especies abundantes, pero el eDNA detectó especies adicionales que no fueron capturadas o resultaron difíciles de capturar con métodos tradicionales. Este estudio subraya que, aunque el eDNA metabarcoding es una herramienta poderosa para la evaluación de la biodiversidad y su eficacia está condicionada por la calidad y exhaustividad de las bases de datos de referencia.
Estudio de las hojas de Alternanthera ficoidea (L.) P. Beauv y su efecto antitumoral.
(2024) Regalado Martínez, Johana Esther
El cáncer es una patología compleja, que afecta al paciente, su familia, sociedad y sistema de salud. El cáncer tiene altas tasas de incidencia, haciéndolo un problema de orden mundial y aunque existen tratamientos, ellos tienen efectos secundarios. Las plantas medicinales son fuente de terapéuticos de bajo costo, y de fácil acceso. Entre ellas esta A. ficoidea (L.) P. Beauv (A.f) o “periquito amarillo”, abundante en la triple frontera entre Brasil, Argentina y Paraguay, en el saber popular se asocia a beneficios para la salud, aunque no se han hecho estudios que concreticen sus efectos. Por tanto, este trabajo busco investigar químicamente los compuestos de las hojas de A.f, usando dos extracciones: una hidroalcohólica (EH) 70% (v/v) y otra de fracción lipídica (FL) usando cloroformo, metanol y agua, 2:2:1 (v/v/v); para evaluar sus efectos antiproliferativos y en la estructura celular de células cancerígenas (MIA PaCa-2), y células no cancerígenas (MRC-5, HBMEC). Se realizaron análisis de compuestos fenólicos totales, flavonoides y la evaluación del potencial antioxidante del EH. El perfil de ácidos grasos (AG) presentes de FL se determinó por cromatografía en fase gaseosa acoplada a espectrofotometría de masas (GC-MS). Para los ensayos de proliferación celular y encontrar IC50 se usó MTT (3-(4,5-dimetiltiazol-2yl)-2,5-di- fenil brometo de tetrazolina), y microscopia de fluorescencia como ensayo confirmatorio. El rendimiento de EH fue de 19,90 % (m/m). Los antioxidantes fueron: compuestos fenólicos 9,04 mg EAG g-1 muestra, flavonoides 0,30 mg EQ g-1 muestra. Y la capacidad antioxidante en ABTS fue 0,395 µmol TE g-1 muestra; DPPH, 21,72 µmol TE g-1 muestra; y FRAP, 71,85 µmol Fe (II) g-1 muestra. En el MTT, para las células el IC50 fue: MIA PaCa-2, 52,51 % (v/v); MRC-5, 41,66 % (v/v); HBMEC, 50,16 % (v/v). En la microscopia de fluorescencia se observó alteraciones en la morfología, desprendimiento y redondeamiento celular; y se confirmó que el EH en concentración de 50 % (v/v) disminuye la proliferación celular en HBMEC y en el tamaño de los núcleos de forma significativa (p< 0,0001), con respecto al control. En FL el rendimiento fue de 3,86 % (m/m). Los AG mayoritarios fueron ácido alfa linolénico (ALA) 3,16 mg g -1 muestra; ácido palmítico, 1,34 mg g -1 muestra; ácido linoleico, 1,18 mg g -1 muestra. El ALA se encontró en el 56,71 % (m/m). En el MTT, para las células el IC50 fue: MIA PaCa-2, 1,045 µg µL-1; MRC-5, 1,123 µg µL-1; HBMEC, 0,472 µg µL-1. En la microscopia de fluorescencia, el efecto antiproliferativo de la FL se verificó en concentraciones de 2,5 y 50,0 µg µL-1 en las tres líneas celulares, siendo significativo para MIA PaCa-2 y MRC5 (p< 0,0001), y no significativo para HBMEC. Los cambios de tamaño observados fueron variables. Los resultados generados en este trabajo muestran los efectos antiproliferativos de las extracciones de A.f en las células utilizadas.
Instabilidade do DNA em portadores de diabetes tipo 2 e pré-diabéticos e sua relação com diferentes estilos de vida.
(2024) Taiane Nogueira Almeida
O diabetes mellitus (DM) é um grupo de doenças metabólicas relacionadas à glicemia elevada, com uma prevalência crescente devido a fatores socioeconômicos, demográficos, ambientais e genéticos. Esse aumento, em grande parte, está relacionado ao diabetes mellitus tipo 2 (DM2) e aos fatores de risco associados, como obesidade, dietas não saudáveis e falta de atividade física. O processo fisiopatológico envolve inicialmente a resistência à insulina e, posteriormente, o comprometimento da função mitocondrial, levando a um estado cronicamente elevado de estresse oxidativo e causando danos oxidativos ao DNA e a outras proteínas. Esse mecanismo está associado ao agravamento do diabetes e ao desenvolvimento de outras doenças, como enfermidades cardiovasculares e insuficiência renal. Nesse contexto, o objetivo deste trabalho foi avaliar a instabilidade genômica em sangue periférico e mucosa oral de indivíduos de 30 a 76 anos com Diabetes mellitus tipo 2 (DM2), pré-diabéticos e não diabéticos, residentes em Foz do Iguaçu, Paraná, que declararam praticar ou não atividades físicas regulares, considerando diferentes hábitos de vida e condições clínicas. Para tanto, o estudo incluiu a coleta de amostras de sangue para testes genotóxicos, raspagem da mucosa oral para avaliação de micronúcleos, medição da glicemia capilar e dosagens de triglicerídeos, lipoproteína de alta densidade, fosfatase alcalina, aspartato aminotransferase e alanina aminotransferase. Os resultados destacaram que as variáveis relacionadas ao dano genético, como micronúcleos em células da mucosa bucal e micronúcleos em eritrócitos, são significativamente mais elevadas em indivíduos com DM2, indicando uma correlação direta entre hiperglicemia crônica e aumento de danos ao DNA (p<0,01), além de marcadores bioquímicos mais proeminentes nos grupos com alterações glicêmicas como o triglicerídeo e o alanina aminotransferase. E os micronúcleos em células da mucosa bucal apresentou sensibilidade significativa para a prática de atividade física dos indivíduos do grupo de diabéticos. Resultados que possibilitaram a caracterização do perfil da instabilidade genômica em indivíduos pré-diabéticos e diabéticos tipo 2 na população de Foz do Iguaçu, PR, auxiliando na busca de estratégias relacionadas à promoção, prevenção e aprimoramento dos tratamentos existentes.
Desenvolvimento de candidatos vacinais para imunização via oral e via banho de imersão contra infecções por Aeromonas hydrophila e Streptococcus agalactiae em Tilápias-do-Nilo (Oreochromis niloticus).
(2024) Santos, Angelo Gabriel Vidal dos
A expansão da aquicultura em escala comercial requer o desenvolvimento de novas tecnologias para aumentar a produção e mitigar surtos de doenças. Entre os patógenos bacterianos predominantes que afetam a tilápia estão Aeromonas spp. e Streptococcus spp., frequentemente ocorrendo coinfecção. O uso de antibióticos para tratar infecções bacterianas apresenta significativos riscos ambientais e de saúde pública. Em resposta, a vacinação surgiu como uma medida profilática, demonstrando notável eficácia na redução das taxas de mortalidade e melhoria do desempenho animal. Embora a administração intraperitoneal (i.p.) seja a rota primária, sua natureza trabalhosa apresenta desafios. Consequentemente, metodologias alternativas, como a imunização oral e banhos de imersão, têm sido exploradas para simplificar a administração e reduzir os custos de mão de obra. Este estudo teve como objetivo formular candidatos a vacina para o controle de infecções por Aeromonas hydrophila e Streptococcus agalactiae em tilápias do Nilo (Oreochromis niloticus), administradas oralmente por incorporação na ração e banhos de imersão. A vacina foi desenvolvida usando antígenos bacterianos isolados de linhagens de tilápia cultivadas e inativadas com formalina. Em ensaios de campo, os peixes foram divididos em dois grupos vacinados: grupo vacinado com ração + reforço de ração (OR+OR), grupo de banho de imersão + reforço de ração (BI+OR), e um grupo controle, e alojados em tanques de malha. Ensaios imunológicos revelaram que ambos os grupos BI+OR e OR+OR produziram anticorpos contra os antígenos, com o grupo BI+OR demonstrando uma resposta imune mais consistente ao longo do estudo. A eficácia das vacinas BI+OR e OR+OR foi de 55,99% e 44,23%, respectivamente. Esses resultados destacam a viabilidade dessas metodologias como técnicas promissoras para a imunização em larga escala de peixes na aquicultura.
Tratamento de solo agrícola contaminado com atrazina por fungos filamentosos imobilizados em carvão ativado.
(2024) Siqueira, Adriana Heiss
A atrazina, herbicida amplamente utilizado na agricultura brasileira, pode contaminar rios e aquíferos devido à sua persistência no solo. Fungos filamentosos tem potencial para degradar a atrazina, mas a extensão das áreas cultivadas torna essa técnica desafiadora. A biorremediação pode ser aprimorada com carvão ativado, cuja estrutura porosa favorece o crescimento de micro-organismos. Este trabalho teve como objetivo a produção de um bioinoculante composto pelos fungos Clonostachys rosea CCMIBA_R018, Purpureocillium lilacinum CCMIBA_R014, e Bjerkandera sp. CCMIBA_R111 imobilizados no carvão ativado para o tratamento de solo contaminado com atrazina. A metodologia, em suma, foi delineada para: identificação da melhor condição de cultivo de cada fungo; avaliação do efeito do carvão ativado no desenvolvimento fúngico; imobilização individual dos fungos a partir de diferentes variações de cultivo; elaboração do bioinoculante a partir do consórcio dos fungos em carvão ativado; avaliação das enzimas Lacase, Manganês Peroxidase e Lignina Peroxidase; e avaliação da ação do inoculante em um sistema de microcosmos de solo agrícola contaminado com atrazina. Para cultivo foi selecionado o caldo Sabouraud Dextrose para os fungos Clonostachys rosea CCMIBA_R018 e Purpureocillium lilacinum CCMIBA_R014 e caldo malte enriquecido com peptona e extrato de levedura para o fungo Bjerkandera sp. CCMIBA_R111. O pré-inóculo de cada fungo individualmente nos meios selecionados com a adição de carvão ativado (5 g), seguido pela incubação conjunta em mais 15 g de carvão ativado e adição de água peptonada 1 % (pH 7) no início do cultivo manteve a viabilidade de crescimento, resultando na melhor condição de consórcio após 21 dias a 28 oC. Apesar do potencial ligninolítico individual, foram observadas atividades significativas de lignina peroxidase quando combinadas, sugerindo efeitos sinérgicos. Os resultados após tratamento do solo revelaram uma redução de 34 % na concentração de atrazina no solo esterilizado e uma redução de 66 % no solo não esterilizado, demonstrando a eficácia em condições reais de solo. Além disso, mais de 30 fatores do solo foram analisados, destacando diferenças significativas em 12 parâmetros, especialmente um aumento nos níveis de fósforo e enxofre, melhorando a fertilidade do solo. Em conclusão, o consórcio fúngico, combinado com carvão ativado, apresenta uma abordagem inovadora de biorremediação, beneficiando a saúde e a produtividade do solo. Esse processo é particularmente inovador, pois a maioria dos bioinoculantes não aborda o tratamento de poluentes.
Eficácia de um extrato à base de Cannabis na redução da dor e na melhora da qualidade de vida em cães com osteoartrite: um ensaio clínico randomizado, duplo-cego e controlado por placebo.
(2024) Nascimento, Francisney Pinto do
A osteoartrite (OA) é uma doença comum que afeta diferentes articulações, principalmente do quadril, levando à perda da cartilagem articular e definindo-se como uma doença articular degenerativa com inflamação sinovial concomitante. O processo inflamatório é mediado por citocinas pró-inflamatórias que promovem sensibilização periférica, levando à nocicepção e dor articular, a principal característica da doença. O tratamento da OA é baseado principalmente no uso de antiinflamatórios não-esteroidais, medicamentos que promovem pouca analgesia e induzem efeitos colaterais gástricos, renais e hepáticos. Devido ao seu papel imunomodulador, promovendo efeito anti-inflamatório e antinociceptivo, os canabinoides são uma opção segura para o tratamento da OA canina. O presente estudo avaliou a eficácia e segurança de um extrato de Cannabis full spectrum contendo canabidiol (CBD) e delta-9-tetrahidrocanabinol (THC) no tratamento da dor e disfunção relacionada à OA em cães. Dezessete cães com OA foram randomizados para receber extrato de Cannabis (3,9 mg/kg de CBD e 0,15 mg/kg de THC) ou placebo por 90 dias. Dor, função e qualidade de vida foram avaliadas por meio do Canine Brief Pain Inventory (CBPI) e do Índice de Dor Crônica de Helsinki. Os cães que receberam o extrato de Cannabis apresentaram melhora significativa na intensidade da dor, bem como melhora na qualidade de vida, em comparação ao placebo. O tratamento com Cannabis também resultou em melhores pontuações nas avaliações veterinárias da mobilidade articular. Este estudo demonstra a eficácia e segurança de um extrato de Cannabis rico em CBD no tratamento da dor e da disfunção em cães com osteoartrite. Os resultados indicam o potencial das terapias à base de canabinoides no tratamento da osteoartrite canina, justificando uma investigação mais aprofundada.
Desenvolvimento de uma vacina quimérica contra Anaplasma phagocytophilum, Ehrlichia canis e Babesia canis em cães.
(2024) Souza, Adrieli Barboza de
Erliquiose, babesiose e anaplasmose são doenças de distribuição mundial que afetam cães, conhecidas como hemoparasitoses caninas. No Brasil, essas doenças, transmitidas pelo carrapato Rhipicephalus sanguineus, apresentam importância veterinária e humana devido ao seu caráter endêmico e potencial zoonótico. As infecções podem causar sintomas graves e inespecíficos, dificultando o diagnóstico e o tratamento eficaz. Embora existam tratamentos disponíveis, a vacinação é considerada a medida preventiva mais eficiente, segura e econômica. Contudo, até o momento, não existe uma vacina quimérica recombinante contra essas hemoparasitoses caninas. Este estudo teve como objetivo desenvolver e avaliar a segurança e imunogenicidade de uma vacina recombinante contra Ehrlichia canis, Babesia canis e Anaplasma phagocytophilum em cães. A proteína quimérica recombinante foi construída utilizando peptídeos imunodominantes das proteínas TRP36, CBA e VirB10, selecionados por seu potencial imunogênico contra E. canis, B. canis e A. phagocytophilum, respectivamente, e por sua natureza conservada. Utilizando técnicas de bioinformática, foram preditos epítopos imunodominantes, resultando em uma quimera expressa em Escherichia coli. Para o estudo, os cães foram distribuídos em quatro grupos experimentais (n=4/grupo): Grupo Vacina (imunizado com proteína quimera com adjuvante saponina e hidróxido de alumínio), Grupo Proteína (imunizado com proteína quimera), Grupo Adjuvante (imunizado com adjuvante saponina e hidróxido de alumínio) e Grupo Controle. Os animais receberam três doses por via subcutânea, com intervalo de 21 dias. As diferentes formulações avaliadas não induziram alterações locais ou sistêmicas, demonstrando-se seguras para administração em animais. A análise da resposta imune humoral revelou que as formulações contendo a proteína quimera, especialmente quando combinada com adjuvantes, induziram níveis significativos de anticorpos IgG anti-proteína quimérica após o protocolo vacinal. Além disso, a avaliação dos níveis de IFN-γ no sobrenadante de culturas de células, utilizando o ensaio ELISA, indicou que a vacina foi capaz de induzir uma resposta imune celular do tipo Th-1 nos grupos Proteína e Vacina, essencial para combater infecções intracelulares. Este estudo fornece evidências de que a proteína quimérica desenvolvida a partir de peptídeos imunodominantes das proteínas VirB10, CBA e TRP36 de A. phagocytophilum, B. canis e E. canis, respectivamente, é imunogênica e segura. Além disso, sugere-se que esta proteína pode ser uma potencial candidata a vacina contra essas hemoparasitoses caninas, necessitando de otimização adicional para garantir a estabilidade em condições práticas.
Avaliação da segurança de um extrato de Cannabis sativa full spectrum pela via oral em cães com osteoartrite: um estudo randomizado, duplo-cego, controlado por placebo com duração de 180 dias.
(2024) Cremonese, Ricardo Penayo
Com o crescente uso dos canabinoides na clínica humana, a utilização na medicina veterinária vem aumentando. Diversos benefícios terapêuticos do uso da Cannabis foram observados na prática veterinária, incluindo a redução da ansiedade, alívio da dor, melhora da mobilidade em animais com osteoartrite, entre outros. Porém poucos estudos abordam a segurança dos canabinoides, principalmente de extratos que contenham THC e outros canabinoides. Em cães, a dose letal de Cannabis é considerada elevada, porém é necessário monitoramento atento, uma vez que esses animais apresentam maior densidade de receptores canabinoides tipo 1 no cérebro em comparação aos humanos. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos e a segurança a longo prazo do uso de canabinoides no tratamento da osteoartrite canina. Realizou-se um ensaio clínico randomizado, duplo-cego e controlado por placebo, no qual cães com OA diagnosticada foram divididos em dois grupos: um recebeu óleo de Cannabis full spectrum e outro recebeu um óleo placebo, ambos administrados por via oral duas vezes ao dia durante 90 dias e uma fase de comparação, onde o grupo placebo recebeu metade da dose do grupo tratado por mais 90 dias. Durante o tratamento, foram avaliados os possíveis efeitos adversos por meio de exames bioquímicos renais e hepáticos, além de uma avaliação neurológica veterinária e um questionário de relato de efeitos adversos preenchido pelos responsáveis. Os resultados demonstraram que não houve relatos de eventos adversos graves e nenhuma alteração significativa nos parâmetros bioquímicos analisados. Esses achados sugerem que o uso a longo prazo de canabinoides no tratamento da osteoartrite em cães é seguro e bem tolerado. Essa abordagem terapêutica alternativa pode representar uma opção promissora para o manejo da dor e inflamação associadas à OA canina, sem os efeitos adversos comumente observados com o uso de AINEs.
Follow-up de uma série de casos do uso terapêutico da ayahuasca para luto patológico: uma análise quanti-qualitativa temática pela perspectiva da psicoterapia assistida por psicodélicos Embark®.
(2023) Pereira, Vítor Guedes; Nascimento, Francisney Pinto do; Donato, Micheline Freire; Nascimento, Francisney Pinto do
O presente estudo utilizou-se da metodologia quantitativa para obtenção e análise de dados numéricos (através de escalas, questionários validados e programas estatísticos) e também lançou mão da análise qualitativa, coletando informações em entrevistas semiestruturadas, com análise qualitativa temática do discurso na perspectiva da autora Laurence Bardin. Investigou-se o processo do luto patológico em quatro indivíduos após quatro anos de um tratamento experimental com o uso terapêutico da bebida ayahuasca de uma única sessão. Especificamente, no braço quantitativo, o objetivo foi identificar as possíveis mudanças (ou não) dos níveis de severidade de luto, ressignificação da perda, depressão, qualidade de vida e prejuízos do sono. No braço qualitativo, o objetivo foi investigar a presença de constructos psicológicos subjacentes às melhoras (ou não) do quadro de luto e de saúde mental geral, como aspectos existenciais-espirituais, atenção plena, consciência corporal, afetividade-cognição, qualidade das relações interpessoais e manutenção do processo terapêutico. Os domínios são considerados centrais na mudança terapêutica em psicoterapias assistidas por psicodélicos, aqui, especificamente, para o novo modelo de Psicoterapia Assistida por Psicodélicos (PAP) Embark®. Os resultados evidenciaram a manutenção dos resultados positivos dos dados quantitativos (investigados até um ano após a experiência pelos primeiros pesquisadores do ensaio clínico), e (nas informações qualitativas extraídas da entrevista semiestruturada) sugeriram que a ayahuasca influenciou positivamente, através de mecanismos e constructos terapêuticos chaves propostos pelo modelo PAP Embark®. Os constructos existencial-espiritual e qualidade das relações interpessoais (relacional) se mostraram mais presentes. Conteúdos psicológicos de cunho espiritual e existencial surgiram de forma profunda, também trazendo à tona figuras de apego importantes, que ajudaram na ressignificação positiva das perdas dos participantes. A atenção plena impactou positivamente a forma de usufruir e vivenciar, com melhor qualidade, o momento presente, a melhora da auto compaixão e o acolhimento consigo. Ao mesmo tempo, o domínio afetivo-cognitivo revelou alterações na percepção do luto e em uma forma mais adaptativa perante o ciclo de vida e morte. Por fim, simultaneamente, notou-se a presença do fenômeno de manutenção do processo terapêutico (keep momentum - mantendo o ímpeto), mesmo os participantes não passando por sessões de integração formais propostas pelo modelo Embark®, as quais, os autores consideram essencial para o desenvolvimento do domínio. Em uma observação ampla, os participantes obtiveram aprendizados e perspectivas pró-saúde mental aplicáveis em sua vida cotidiana, a partir da experiência com a bebida. A melhora revelou-se clinicamente significativa nos quadros de luto e em outros aspectos de saúde mental, mesmo com o modelo (aplicado no ensaio clínico inicial) considerado de suporte básico. Apesar do número pequeno da amostra, os resultados são extremamente satisfatórios, tendo em vista o tempo de luto dos voluntários e tentativas de tratamentos anteriores. Hipotetiza-se que o modelo de PAP Embark®, se aplicado às intervenções, poderá trazer resultados ainda mais salutogênicos.
Investigação de mutações germinativas no gene CDH1 em pacientes oncológicos residentes no município de Missal/PR.
(2023) Bertim, Geovanna Marques Moreira; Terencio, Maria Leandra
As neoplasias malignas são atualmente uma das principais causas de mortalidade no Brasil e no mundo. Sua alta incidência está fortemente ligada a hábitos e estilos de vida que atuam como fatores de risco para o desenvolvimento do câncer. O município de Missal, localizado no oeste do Paraná-Brasil, representa com destaque essa realidade, pois nos últimos anos uma análise comparativa de seus indicadores de assistência oncológica ambulatorial e hospitalar, bem como de taxas de mortalidade, apontou valores elevados quando comparados às populações vizinhas. Variantes germinativas do gene CDH1 estão relacionadas ao câncer gástrico, câncer de mama e outros tumores não gástricos. Nesse contexto, esta pesquisa teve como objetivo investigar alterações no gene CDH1 por meio de sequenciamento capilar em pacientes oncológicos residentes no município de Missal. Este estudo incluiu 33 pacientes oncológicos não aparentados com diagnóstico de câncer gástrico, de mama, colorretal e pancreático. Os éxons 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11, 13, 14 e 15 foram triados, incluindo regiões intrônicas adjacentes aos éxons, permitindo a identificação de possíveis mutações em sítios de splicing. Também foram analisados fatores de risco associados ao adoecimento oncológico como: idade do diagnóstico, hábitos de consumo alimentar, uso de álcool e tabaco, uso de anticoncepcional e terapia de reposição hormonal e sobrepeso. No total, foram identificadas 3 variantes germinativas, duas missense (c.1849G>A e c.1936A>G) e uma mutação sinônima (c.462A>G). Nenhuma variante germinativa patogênica do gene CDH1 foi identificada na população do estudo. Ainda, as análises estatísticas mostraram que a população amostrada possui histórico familiar de câncer, idade média do diagnóstico oncológico inferior ao da idade média brasileira e fatores de riscos significativos para o adoecimento oncológico.
Efeito de microdoses de canabinoides para tratamento da doença de Alzheimer: um ensaio clínico, duplo-cego, randomizado e controlado por placebo.
(2023) Cury, Rafael de Morais
A doença de Alzheimer (DA) está relacionada ao acúmulo de neurotoxinas derivadas de frações beta-amilóides e da hiperfosforilação da proteína Tau, que leva a um processo de neurodegeneração e a um comprometimento cognitivo. A conexão entre demência, inflamação, frações beta amilóides (BA) e alterações no sistema endocanabinoide em modelos experimentais de DA tem sido relatada. Atualmente, há poucos estudos publicados examinando o efeito de canabinóides na patologia da DA. A premissa neste estudo é que o desequilíbrio no sistema endocanabinoide ocorre de maneira correlacionada à DA e que microdoses de canabinóides podem reestabelecer as funções cerebrais, sem indução de efeitos colaterais significativos. Avaliou-se o efeito de microdoses de canabinoides em pacientes com DA, por meio de um ensaio clínico, randomizado, duplo-cego e controlado por placebo. Foram selecionados pacientes segundo os critérios da National Institute of Neurological and Communicative Disorders and Stroke and the Alzheimer’s Disease and Related Disorders Association. Os participantes foram divididos em dois grupos, tratado e placebo. Cada paciente tomou 0,35 mL do óleo em uma concentração de 1 mg/mL de THC e 0,7 mg/mL de CBD, administradas uma única vez ao dia, por um período de 180 dias (6 meses). O placebo foi constituído apenas por azeite de oliva. As avaliações clínicas mensais foram com o uso das ferramentas Mini Exame do Estado Mental (MEEM), Escala de avaliação da DA (ADAS-cog) e DSRS. Além disso, o estudo constou de coletas de líquor antes do tratamento (base line – T0), e ao final da pesquisa (T6) para quantificação de BDNF e TAU total. Foram avaliados 141 participantes, 113 foram excluídos devido aos critérios, restando 28. Destes 24 participantes terminaram o estudo. Após, randomização foi possível obter homegeneidade dos grupos para as características epidemiológicas, sociodemograficas e clínicas. Pela análise ANCOVA com variável dependente o último tempo de pesquisa (T6), variável independente grupo tratado/placebo e covariavel o basal de cada paciente pela escala CDR, foi possível obter diferença estatística para o escore MEEM (p=0,028) com melhora da capacidade cognitiva no grupo tratado, demonstrando uma melhora cognitiva sustentada ao final de seis meses de tratamento. Já para o ADAScog (p=0.854) e DSRS (p=0,725) não foi encontrado diferença estatística. Pelo método estatístico ANOVA de medidas repetidas não se obteve uma diferença estatística nas dosagens de BNDF e TAU total tanto entre os grupos como entre T0 e T6. Este estudo demonstrou evidência clínica que o tratamento com canabinoide é eficaz para tratar a DA após seis meses de tratamento. Os resultados deste trabalho sugerem novas abordagens terapêuticas para a DA baseando-se em canabinóides.
Perfil da microbiota intestinal humana de pacientes com Covid-19
(2024) Machado, Nereu Serafim; Orientação
O vírus Sars-CoV-2, causador da doença Covid-19, foi responsável por uma pandemia que assombrando o mundo, desde o final do ano de 2019. Essa doença se disseminou rapidamente resultando em graves efeitos sobre a saúde pública e, consequentemente, sobre os aspectos socioeconômicos em escala global. Estudos vêm sendo desenvolvidos a fim de maior compreensão da doença, pela necessidade urgente de estratégias e terapias que visem frear o rápido avanço e gravidade da doença. A microbiota humana tem papel fundamental no funcionamento do organismo, influenciando desde a digestão de alimentos até a imunomodulação do sistema imune. O RNA viral do coronavírus já foi encontrado na microbiota intestinal de pacientes infectados e, estudos já demonstraram uma correlação entre a gravidade da infecção por SARS-CoV-2 e a diversidade dessa microbiota natural, o que enfatiza a necessidade de mais estudos para sua compreensão. Assim, o entendimento das relações entre as comunidades microbianas pertencentes no intestino de pacientes acometidos com o Covid-19 poderá elucidar possíveis ferramentas que irão proporcionar mais informações a respeito dessa doença que acometeu a população mundial. Neste sentido, o presente projeto avaliou os efeitos da Covid-19 nas comunidades microbianas de pacientes de diferentes idades com e sem sintomas da doença, bem como suas interações com o hospedeiro humano, utilizando a abordagem Metabarcoding. Para realizar a análise do processamento dos dados, foram utilizadas ferramentas tanto do pipeline Qiime2 e Galaxy Europe. Após análise de Metabarcoding de cada uma das 3 amostras de fezes coletadas dos 6 pacientes (total de amostras n=18), obteve-se um total de 534.769 sequências listadas em arquivo de metadados. Através dos dados coletados, observamos que a doença da Covid-19 afetou significativamente a diversidade alfa, os pacientes controlem que não entraram em contato com o vírus de SARS-CoV-2 (CT1; CT2) obtiveram valores relativos de diversidade microbiana mais elevados quando comparados aos outros indivíduos que contraíram a doença. Além disso, pode-se evidenciar a complexidade para encontrar correlação das Aqueias com doenças, especialmente aquelas causadas por vírus. Este estudo apresenta uma diferença notável da presença de arqueias nos diferentes pacientes, enfatizando sua correlação com aspectos da doença que devem ser investigados mais a fundo. A análise das principais vias metabólicas (Kegg function, Ec fuction e MetaCyc function) demostrou uma produção mais atenuada da L-isoleucina (PWY-5103) pelo paciente com sintomas graves da Covid-19 (GV2) em relação aos demais pacientes analisados. Já as vias Glutaryl-CoA degradation (PWY-3001) e D-galacturonate degradation I (GALACTUROCAT-PWY), responsáveis pela síntese do butirato, demonstraram valores baixos nas amostras do paciente com Covid-19 grave. Outros fatores predominantemente diminuídos nas amostras do paciente grave foram as vias relacionadas a PWY-1269 CMP-3-deoxy-D-mannooctulosonate biosynthesis I e PWY-7220 adenosine deoxyribonucleotides de novo biosynthesis II, vias cuja subclasse corresponde a biossíntese de nucleotídeos. Evidências da diminuição das vias de produção de ácidos graxos de cadeia curta associada a Covid-19 em pacientes graves, além da diminuição dos níveis de butirato fecal e aumento dos níveis de citocinas pró-inflamatórias IL10 e quimiocina CXCL-10, destacam a importância dessas vias metabólicas na patogênese da Covid-19. O presente estudo destaca a importância da análise das vias funcionais dentro da diversidade do microbioma intestinal, enfatizando sua importância na compreensão do curso da Covid-19. O estudo das perturbações nas funções microbianas intestinais abre caminho para entender o papel do microbioma intestinal na progressão da doença no Covid-19.
Determinação de Ácidos Graxos Voláteis em Lodo Anaeróbio por Extração Líquido-Líquido e Cromatografia Gasosa Acoplada a Detector de Ionização por Chama
(2023) Oliveira, Camila Jonsson; Orientação
O Brasil é um grande produtor de carne suína. Entretanto, o efluente de suinocultura pode causar diversos prejuízos ambientais. Portanto, para viabilizar o aproveitamento de dejeto animal deve-se diminuir a carga poluente desses resíduos. A digestão anaeróbia é uma tecnologia que permite a estabilização do efluente, além de produzir biogás. Os ácidos graxos voláteis (AGVs) são compostos orgânicos originados durante a produção de biogás, e sua concentração pode prever desequilíbrios do processo, pois o acúmulo de AGVs favorece a redução do pH, diminuindo o rendimento de metano no biogás. Este estudo teve como objetivo desenvolver e validar uma metodologia analítica para determinar a concentração de ácido acético, ácido propiônico, ácido isobutírico, ácido butírico, ácido isovalérico e ácido valérico em amostras de biodigestores do tipo BLC (biodigestor de lagoa coberta), a fim de relacionar os AGVs a outros parâmetros de monitoramento da produção de biogás, e auxiliar na tomada de decisões para garantir a eficiência destes reatores. O planejamento fatorial completo foi empregado para otimização da metodologia de extração líquido-líquido dos AGVs, seguido de análise por cromatografia em fase gasosa com detector de ionização em chama (CG-DIC). Utilizou-se os seguintes parâmetros: solvente extrator (3 níveis), pH (2 níveis) e força iônica (2 níveis). Como resultados foram selecionados a acetona como solvente extrator em pH 3 e a solução saturada do sal bissulfato de potássio, para efeito de salting out. A metodologia foi validada, através dos parâmetros linearidade, homocedasticidade, limite de detecção (LD), limite de quantificação (LQ), repetibilidade e recuperação. Os parâmetros de validação atenderam aos critérios do Inmetro. No que se refere ao desempenho dos biodigestores, a produtividade e rendimento de biogás, produtividade e rendimento de metano, se apresentaram inferiores à literatura. Porém, estes parâmetros dependem da composição do substrato e carga orgânica volumétrica (COV). Por outro lado, o teor de metano, razão de FOS/TAC, concentração de AGVs, demonstraram-se de acordo com a literatura.
Atividade de Glutaminase e Perfil Antitumoral e Antimicrobiano de Microrganismos Isolados da Antártica
(2023) Camacho, Karine Fernandes
O continente Antártico apresenta características ambientais adversas, principalmente extremos de temperatura. Devido a suas particularidades a Antártica abriga uma diversidade microbiana ainda pouco explorada, porém de inestimável valor ambiental e biotecnológico, pois devido a adaptação ao frio, os microrganismos produzem compostos com características diferenciadas das que conhecemos atualmente. Considerando tal importância, o presente estudo teve como objetivo a busca por microrganismos produtores da enzima L-glutaminase com ativididade antitumoral e metabólitos com atividade antimicrobiana, a partir do isolamento de fungos e bactérias de amostras de sedimento marinho coletado no continente Antártico. Ao todo foram isolados 89 microrganismos, 79 bacterias e 17 fungos filamentosos, os quais foram submetidos a triagem para produção de L-glutaminase pela utilização do substrato glutamina e vermelho de fenol a 0,009% como revelador. Os isolados considerados positivos foram submetidos a preparação de extrato enzimático e avaliação contra células tumorais de carcinoma pancreático (linhagem MIA PaCa-2) e células fibroblásticas normais (linhagem MRC-5), através de ensaio de proliferação celular pelo método MTT. Por sua vez, a atividade antimicrobiana foi realizada com extratos microbianos a partir de testes de disco difusão, seguido de teste de MIC utilizando extrato microbiano diclorometânico de 4 bactérias e 4 fungos filamentosos, contra as bactérias patogênicas: Escherichia coli, Micrococcus luteus, Pseudomonas aeruginosa e Staphylococcus aureus. Dos isolados que apresentaram os melhores resultados, dois foram selecionados para caracterização molecular realizada através de empresa privada (GoGenetic) e posterior análise filogenética utilizando o software MEGA11. Os extratos enzimaticos dos isolados FDG01 (não identificado), FDG02 (Pseudogymnoascus sp.) e FAD33 (Penicillium sp.) demonstraram potencial ação antiproliferativa frente às células MIA PaCa-2, apresentando IC50 de 16,74 12,08 e 13,93%, respectivamente. Ao mesmo tempo, os extratos enzimáticos desses isolados não apresentaram efeito tóxico sobre as células fibroblásticas não tumorais. Com relação à atividade antimicrobiana, de modo geral, os extratos microbianos apresentaram atividade antibacteriana de amplo espectro, inibindo bacterias gram-negativas e gram-positivas. O extrato do isolado FDG01 inibiu as quatro espécies bacterianas testadas enquanto o extrato do isolado FDG02 (Pseudogymnoascus sp.) inibiu o crescimento de Micrococcus luteus em baixa concentração (MIC 0,015625 mg mL-1). Dessa forma, os resultados observados são promissores e sugerem que existe uma riqueza microbiana inexplorada em ambientes Antárticos voltados para a bioprospecção de compostos com potencial aplicação farmacêutica.
Células Madre como Aditivo para el Aumento de Viabilidad de Concentrados Sanguineos Caninos en Transfusiones
(2023) Marmol, Luis Alberto Beltran
Durante el almacenamiento de la sangre en los bancos de sangre, los glóbulos rojos se encuentran en una condición “artificial”, la que conlleva a variaciones metabólicas y mecánicas que resultan en una disminución de la capacidad de entrega de oxígeno. En algunos estudios se ha demostrado que células madre mesenquimales (MSCs) pueden rescatar casos de anemia y reconstituir la hematopoyesis. También se ha demostrado su alta capacidad de regulación celular en el ambiente en el que están inmersas; basándonos en estos datos y considerando las funciones de las MSCs; usamos MSCs como aditivo en una relación 1000:1 en concentrados sanguíneos caninos para evaluar si logran disminuir el daño que sufren los glóbulos rojos durante el almacenamiento; al final de este estudio observamos que no se encontró evidencia que en esa proporción hubo variación en cuanto a la vida media de los glóbulos rojos. Sin embargo, logramos aislar, expandir y congelar MSCs a partir de tejido adiposo canino, así como validarlas.
Efecto Antitumoral in Vitro del Aceite Esencial de Ñandypá (Genipa americana L.) sobre Líneas Celulares de Carcinoma Pancreático Humano(MIA PaCa2)
(2023) Montiel Fernández, Eva Ruzena
A biodiversidade sudamericana ainda é um reservatório de compostos novos com possível ação terapêutica. Atualmente, o câncer é uma das maiores problemáticas a nível mundial, com as maiores taxas de morbilidade e mortalidade, e com poucos tratamentos, muitos deles só paliativos. A Ñandypá tem sido relatada como uma planta medicinal com variadas propriedades. Neste trabalho, o objetivo foi determinar o efeito antitumoral in vitro de um óleo essencial de Ñandypá sobre linhagens celulares de carcinoma pancreático humano (MIA PaCa2). As folhas de Ñandypá foram secas e trituradas, esse material foi utilizado para a preparação do óleo essencial. Células tumorais pancreáticas e células fibroblásticas normais foram submetidas à avaliação da atividade antitumoral do óleo de Genipa americana L. Foram feitas diluições seriadas de 0,1% - 0,5% - 1% - 1,5% -5% e 10% do aceite essencial e os efeitos da viabilidade celular foram avaliados usando o ensaio MTT. Por fim, os resultados foram lidos em espectrofotômetro a 570nm e 630nm. Os resultados da exposição das células a quatro horas de tratamento com as diferentes concentrações mostraram uma alta taxa de mortalidade celular, sendo mais pronunciada em altas concentrações do óleo G. americana L. Desta forma apresentamos evidências de que o óleo poderia vir a ter potencial como droga terapêutica para tratar o câncer pancreático. No entanto, ainda não se sabe qual componente exato do óleo é o que produz o efeito antitumoral.
Avaliação da Relação entre Jetlag Social e Saúde Cardiometabólica em uma Coorte Familiar Brasileira - Corações de Baependi
(2023) Gnoatto, Fabio Lucas Cemenci; Beijamini, Felipe
O sistema de temporização circadiana é responsável pela geração e sincronização dos ritmos biológicos. Há evidências da associação entre a dessincronização circadiana e maior risco para síndrome metabólica, maiores valores de colesterol total, triglicerídeos, pior controle glicêmico. Uma maneira de acessar a dessincronização circadiana é avaliando o Jetlag Social. Nesse contexto, trabalhamos com o objetivo de avaliar o Jetlag Social em indivíduos participantes do estudo Corações de Baependi e testar sua relação com a saúde cardiometabólica. Onde o Jetlag Social foi categorizado em baixo (≥ 25 min), intermediário (< 25 min e > 85 min) e alto (≤ 85 min). Os dados de 1269 indivíduos (média de idade 47±13,8) foram analisados, apresentando uma de média de 59,2 (± 48 min) minutos de Jetlag Social. Para isso foram aplicados testes estatísticos: o teste t de Student realizado para comparações entre as médias para as variáveis dos padrões de sono e cardiometabólicas, a Análises de variância (ANOVA) de uma via foi utilizada para as comparações entre as médias das variáveis do sono e os grupos da classificação do Jetlag Social. Na sequência, foram utilizados três modelos estatísticos para testar a relação entre o Jetlag Social e a saúde cardiometabólica. Para descrever a influência do Jetlag Social sobre as variáveis cardiometabólicas, foi aplicado o teste de Modelo Linear Generalizado (GLM). Para testar o quanto a variação do Jetlag Social pode vir a explicar as variações nas variáveis cardiometabólicas foi aplicado o teste de modelo de Regressão Linear Múltipla. Por fim, foi realizado a análise de Regressão Logística para identificar os fatores preditivos das variáveis Pressão alta, Triglicerídeo elevado, Colesterol total elevado, HDL-c baixo, LDL-c elevado, Não-HDL-c elevado e Diabetes. Os sujeitos do grupo Jetlag Social Alto apresentaram maior privação de sono durante a semana, refletida no aumento da duração de sono nos dias livres. O Jetlag Social apresentou apenas uma influência sobre a Circunferência da Cintura, a partir de uma interação com o sexo feminino, explicou uma pequena parte das variações dos valores das variáveis Circunferência da Cintura e Triglicerídeos. Por fim, apresentou efeito preditivo apenas na relação com a variável HDL-c baixo. Em conclusão, esse estudo adiciona evidências em favor de que o Jetlag Social apresenta uma relação na piora da saúde cardiometabólica da coorte de Baependi.
Efeito Cicatrizante in Vitro do Extrato Aquoso do Barbatimão (Stryphnodendron adstringens), Papaína (Carica papaya) e Dexametasona
(2023) Neto, Daniela de Paula; Ruiz, Jorge
O processo de cicatrização de feridas é um importante mecanismo de defesa e recuperação do organismo, que visa a recuperação da homeostasia e reparação de uma área lesionada. A utilização de plantas com fins medicinais é uma prática milenar, o Brasil é um país rico em biodiversidade, e que tem como costume a utilização de plantas medicinais para tratamento de doenças e afecções, portanto esta prática vem sendo reconhecida e incorporada pelo Sistema único de saúde. O extrato da casca do barbatimão, uma árvore do cerrado brasileiro é popularmente utilizada com fins medicinais por seu efeito cicatrizante. Já a papaína uma enzima isolada do látex do mamão, utilizada para o tratamento de feridas por realizar desbridamento da ferida e acelerando o processo de cicatrização. Diversos fármacos presentes no mercado tem o intuito de auxiliar nas diferentes etapas do processo de reparo tecidual, dentre eles podemos destacar a dexametasona, um corticóide amplamente utilizado como anti-inflamatório, apresentando bons efeitos nas etapas iniciais do processo de cicatrização, mas que, de acordo com a literatura, retarda as etapas finais da cicatrização. Diante disso, propomos este estudo para avaliar o efeito cicatrizante do barbatimão, da papaína e dexametasona em linhagem celular de fibroblastos (MRC-5). Foi realizado a obtenção do extrato do barbatimão, posteriormente foi realizado ensaio de citotoxicidade do barbatimão, papaína e dexametasona e selecionado as melhores concentrações, do extrato aquoso de barbatimão: 12,5%; 3,37%; 0,84% e 0,42%. Da papaína as seguintes concentrações: 125 µg/ml; 31,25 µg/ml; 7,81 µg/ml. E dexametasona a concentração de 0,004 nM. Posteriormente, foi realizada a avaliação da motilidade celular mediante o ensaio de cicatrização, a morfologia foi avaliada por tinção fluorescente, e então realizadas as análises estatísticas para avaliar o efeito cicatrizante. Os resultados nos mostraram que o barbatimão e a papaína não apresentaram efeito citotóxicos em células MRC-5 e que induziram aumento da viabilidade celular, já a dexametasona apresentou citotoxicidade em quase todas as diluições, somente uma diluição apresentou viabilidade em células MRC-5.

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