Desenvolvimento do ensaio qualitativo por amplificação isotérmica mediada por Loop (LAMP) para diagnóstico de leishmaniose visceral canina.
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Data
2024
Autores
Barcellos, Ema Carolina Almeida
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Resumo
A Leishmaniose Visceral Canina (LVC) é uma zoonose transmitida através da picada de flebotomíneos infectados pelo protozoário do gênero Leishmania da família Trypanosomatidae e representa uma preocupação significativa para a saúde pública em áreas endêmicas. Este estudo teve como objetivo desenvolver um ensaio qualitativo para a detecção de Leishmaniose Visceral Canina por meio da reação isotérmica mediada por loop (LAMP). Considerando amostras de sangue de 53 cães sintomáticos, o ensaio foi padronizado utilizando um protocolo pré-estabelecido e comparado com a técnica molecular padrão ouro (qPCR). Durante o processo de padronização, identificaram-se desafios relacionados à reprodutibilidade, fenômeno amplamente documentado na literatura científica, estes desafios foram enfrentados através da implementação de práticas laboratoriais apropriadas. Apesar dos desafios, os resultados destacam o potencial do método LAMP como uma abordagem eficaz e precisa para o diagnóstico de cães sintomáticos, contribuindo para o controle da Leishmaniose Visceral Canina e prevenção da transmissão zoonótica. A análise revelou que o método LAMP evidenciou uma sensibilidade de 100% (IC 95%) e especificidade de 100% (IC 95%) para amostras de sangue. A análise da Curva ROC reforçou a capacidade do LAMP em distinguir entre cães com Leishmaniose Visceral Canina e controles saudáveis, consolidando sua eficácia como uma ferramenta diagnóstica confiável.
Abstract
Canine Visceral Leishmaniasis (CVL) is a zoonosis transmitted through the bite of sandflies infected by the protozoan of the genus Leishmania of the Trypanosomatidae family and represents a significant concern for public health in endemic areas. This study aimed to develop a qualitative assay for the detection of Canine Visceral Leishmaniasis through the loop-mediated isothermal amplification (LAMP) technique. Blood samples from 53 symptomatic dogs were considered for the assay, which was standardized using a pre-established protocol and compared with the gold standard molecular technique (qPCR). During the standardization process, challenges related to reproducibility were identified, a phenomenon widely documented in the scientific literature. These challenges were addressed through the implementation of appropriate laboratory practices. Despite the challenges, the results highlight the potential of the LAMP method as an effective and accurate approach for diagnosing symptomatic dogs, contributing to the control of Canine Visceral Leishmaniasis and the prevention of zoonotic transmission. The analysis revealed that the LAMP method had a sensitivity of 100% (95% CI) and 100% specificity (95% CI) for blood samples. The ROC Curve analysis reinforced the ability of LAMP to distinguish between dogs with Canine Visceral Leishmaniasis and healthy controls, consolidating its effectiveness as a reliable diagnostic tool.
Descrição
Dissertação de mestrado apresentada ao Programa de Pós-Graduaçãoem Biociências, do Instituto Latino-Americano de Ciências da Vida e da Natureza, da Universidade Federal da Integração Latino-Americana, como requisito parcial à obtenção do título de Mestre em Ciências, área de concentração Biociências.
Palavras-chave
leishmaniose visceral canina, LAMP (Reação Isotérmica Mediada por Loop), zoonose, protozoário.
Citação
BARCELLOS, Ema Carolina Almeida. Desenvolvimento do ensaio qualitativo por Amplificação Isotérmica Mediada por Loop (LAMP) para diagnóstico de Leishmaniose Visceral Canina. Orientadores: VIANA, Kelvinson Fernandes (orientador). 59 f.. Dissertação (Mestrado) - PPG-BC (Programa de Pós-Graduação em Biociências), UNILA (Universidade Federal da Integração Latino-Americana), Foz do Iguaçu, 2024.