Desarrollo del sistema DETECTR (CRISPR-Cas12a) para la detección del virus del dengue en aguas residuales
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Fecha
2025-12-19
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Resumen
El virus del dengue (DENV) constituye una amenaza significativa para la salud pública. Sus cuatro serotipos y la similitud de síntomas con otras infecciones virales complica su diagnóstico y control. En este contexto, la Epidemiología Basada en Aguas Residuales (WBE) emerge como una herramienta prometedora para el monitoreo del DENV, ya que monitorea la circulación a nivel poblacional sin la necesidad de exámenes individuales y contempla la excreción tanto de pacientes sintomáticos como asintomáticos. Sin embargo, la baja concentración y la rápida degradación del RNA viral en las muestras de aguas residuales exigen plataformas de detección con una sensibilidad superior a las metodologías convencionales. El objetivo de este proyecto fue desarrollar un sistema de diagnóstico molecular basado en DETECTR (CRISPR-Cas12a) para la detección sensible y específica del RNA del DENV en muestras de aguas residuales en la ciudad de Foz do Iguaçu, PR. Para ello, se diseñaron crRNAs específicos para DENV-2 y DENV-3, se realizó la producción in vivo y la purificación de la proteína AsCas12a, y se comprobó la actividad catalítica del complejo ribonucleoproteico (RNP). Los resultados confirmaron la funcionalidad del sistema in vitro, aunque demostraron una fuerte dependencia de las condiciones del buffer de reacción; se desarrollaron metodologías de extracción de material genético viral de muestras de aguas residuales para la posterior validación del sistema DETECTR; así también, fue diseñado un complejo in vivo para la detección múltiple del DENV. Se concluye que el sistema DETECTR es una herramienta viable y sensible para la detección del DENV en aguas residuales, en la cual son necesarias optimizaciones en las condiciones de reacción para mitigar la inhibición de la matriz y garantizar la robustez de detección.
Abstract
Descripción
Disertación de maestría presentada al Programa de Posgrado en Biociencias, del Instituto Latinoamericano de Ciencias de la Vida y de la Naturaleza, de la Universidad Federal de la Integración Latinoamericana, como requisito parcial a la obtención del título de Maestra en Ciencias.
Palabras clave
DENV, AsCas12a, vigilancia sanitaria, epidemiología, WBE.
Citación
SUAZO, María Esther Vivanco. 2025. Desarrollo del sistema DETECTR (CRISPR-Cas12a) para la detección del virus del dengue en aguas residuales. Orientadores: ROJAS, Cristian Antonio (orientador). 63 h.. Disertación (Maestría) - PPG-BC (Programa de Posgrado en Biociencias), UNILA (Universidad Federal de la Integración Latinoamericana), Foz de Iguaçu.