Desenvolvimento de uma vacina quimérica contra Anaplasma phagocytophilum, Ehrlichia canis e Babesia canis em cães.
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Data
2024
Autores
Souza, Adrieli Barboza de
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Resumo
Erliquiose, babesiose e anaplasmose são doenças de distribuição mundial que afetam cães, conhecidas como hemoparasitoses caninas. No Brasil, essas doenças, transmitidas pelo carrapato Rhipicephalus sanguineus, apresentam importância veterinária e humana devido ao seu caráter endêmico e potencial zoonótico. As infecções podem causar sintomas graves e inespecíficos, dificultando o diagnóstico e o tratamento eficaz. Embora existam tratamentos disponíveis, a vacinação é considerada a medida preventiva mais eficiente, segura e econômica. Contudo, até o momento, não existe uma vacina quimérica recombinante contra essas hemoparasitoses caninas. Este estudo teve como objetivo desenvolver e avaliar a segurança e imunogenicidade de uma vacina recombinante contra Ehrlichia canis, Babesia canis e Anaplasma phagocytophilum em cães. A proteína quimérica recombinante foi construída utilizando peptídeos imunodominantes das proteínas TRP36, CBA e VirB10, selecionados por seu potencial imunogênico contra E. canis, B. canis e A. phagocytophilum, respectivamente, e por sua natureza conservada. Utilizando técnicas de bioinformática, foram preditos epítopos imunodominantes, resultando em uma quimera expressa em Escherichia coli. Para o estudo, os cães foram distribuídos em quatro grupos experimentais (n=4/grupo): Grupo Vacina (imunizado com proteína quimera com adjuvante saponina e hidróxido de alumínio), Grupo Proteína (imunizado com proteína quimera), Grupo Adjuvante (imunizado com adjuvante saponina e hidróxido de alumínio) e Grupo Controle. Os animais receberam três doses por via subcutânea, com intervalo de 21 dias. As diferentes formulações avaliadas não induziram alterações locais ou sistêmicas, demonstrando-se seguras para administração em animais. A análise da resposta imune humoral revelou que as formulações contendo a proteína quimera, especialmente quando combinada com adjuvantes, induziram níveis significativos de anticorpos IgG anti-proteína quimérica após o protocolo vacinal. Além disso, a avaliação dos níveis de IFN-γ no sobrenadante de culturas de células, utilizando o ensaio ELISA, indicou que a vacina foi capaz de induzir uma resposta imune celular do tipo Th-1 nos grupos Proteína e Vacina, essencial para combater infecções intracelulares. Este estudo fornece evidências de que a proteína quimérica desenvolvida a partir de peptídeos imunodominantes das proteínas VirB10, CBA e TRP36 de A. phagocytophilum, B. canis e E. canis, respectivamente, é imunogênica e segura. Além disso, sugere-se que esta proteína pode ser uma potencial candidata a vacina contra essas hemoparasitoses caninas, necessitando de otimização adicional para garantir a estabilidade em condições práticas.
Abstract
Ehrlichiosis, babesiosis and anaplasmosis are diseases that affect dogs worldwide and are known as canine hemoparasitoses. In Brazil, these diseases, transmitted by the tick Rhipicephalus sanguineus, are of veterinary and human importance due to their endemic nature and zoonotic potential. Infections can cause severe and nonspecific symptoms, making diagnosis and effective treatment difficult. Although treatments are available, vaccination is considered the most efficient, safe and cost-effective preventive measure. However, to date, there is no recombinant chimeric vaccine against these canine hemoparasitoses. This study aimed to develop and evaluate the safety and immunogenicity of a recombinant vaccine against Ehrlichia canis, Babesia canis and Anaplasma phagocytophilum in dogs. The recombinant chimeric protein was constructed using immunodominant peptides from the TRP36, CBA and VirB10 proteins, selected for their immunogenic potential against E. canis, B. canis and A. phagocytophilum, respectively, and for their conserved nature. Using bioinformatics techniques, immunodominant epitopes were predicted, resulting in a chimera expressed in Escherichia coli. For the study, the dogs were distributed into four experimental groups (n=4/group): Vaccine Group (immunized with chimera protein with saponin and aluminum hydroxide adjuvant), Protein Group (immunized with chimera protein), Adjuvant Group (immunized with saponin and aluminum hydroxide adjuvant) and Control Group. The animals received three doses subcutaneously, with an interval of 21 days. The diferente formulations evaluated did not induce local or systemic alterations, proving to be safe for administration in animals. The analysis of the humoral immune response revealed that the formulations containing the chimeric protein, especially when combined with adjuvants, induced significant levels of anti-chimeric protein IgG antibodies after the vaccination protocol. Furthermore, the evaluation of IFN-γ levels in the cell culture supernatant, using the ELISA assay, indicated that the vaccine was able to induce a Th-1 cellular immune response in the Protein and Vaccine groups, essential to combat intracellular infections. This study provides evidence that the chimeric protein developed from immunodominant peptides of the VirB10, CBA and TRP36 proteins of A. phagocytophilum, B. canis and E. canis, respectively, is immunogenic and safe. Furthermore, it is suggested that this protein may be a potential vaccine candidate against these canine hemoparasitoses, requiring further optimization to ensure stability under practical conditions.
Descrição
Dissertação de mestrado apresentada ao PPG-BC (Programa de Pós-Graduação em Biociências), do ILACVN (Instituto Latino-Americano de Ciências da Vida e da Natureza), da UNILA (Universidade Federal da Integração Latino-Americana), como requisito parcial à obtenção do título de Mestre em Ciências.
Palavras-chave
proteína recombinante, bioinformática, hemoparasitoses, vacinologia reversa, proteína quimérica.