Estudio de las hojas de Alternanthera ficoidea (L.) P. Beauv y su efecto antitumoral.

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Data

2024

Autores

Regalado Martínez, Johana Esther

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Resumo

El cáncer es una patología compleja, que afecta al paciente, su familia, sociedad y sistema de salud. El cáncer tiene altas tasas de incidencia, haciéndolo un problema de orden mundial y aunque existen tratamientos, ellos tienen efectos secundarios. Las plantas medicinales son fuente de terapéuticos de bajo costo, y de fácil acceso. Entre ellas esta A. ficoidea (L.) P. Beauv (A.f) o “periquito amarillo”, abundante en la triple frontera entre Brasil, Argentina y Paraguay, en el saber popular se asocia a beneficios para la salud, aunque no se han hecho estudios que concreticen sus efectos. Por tanto, este trabajo busco investigar químicamente los compuestos de las hojas de A.f, usando dos extracciones: una hidroalcohólica (EH) 70% (v/v) y otra de fracción lipídica (FL) usando cloroformo, metanol y agua, 2:2:1 (v/v/v); para evaluar sus efectos antiproliferativos y en la estructura celular de células cancerígenas (MIA PaCa-2), y células no cancerígenas (MRC-5, HBMEC). Se realizaron análisis de compuestos fenólicos totales, flavonoides y la evaluación del potencial antioxidante del EH. El perfil de ácidos grasos (AG) presentes de FL se determinó por cromatografía en fase gaseosa acoplada a espectrofotometría de masas (GC-MS). Para los ensayos de proliferación celular y encontrar IC50 se usó MTT (3-(4,5-dimetiltiazol-2yl)-2,5-di- fenil brometo de tetrazolina), y microscopia de fluorescencia como ensayo confirmatorio. El rendimiento de EH fue de 19,90 % (m/m). Los antioxidantes fueron: compuestos fenólicos 9,04 mg EAG g-1 muestra, flavonoides 0,30 mg EQ g-1 muestra. Y la capacidad antioxidante en ABTS fue 0,395 µmol TE g-1 muestra; DPPH, 21,72 µmol TE g-1 muestra; y FRAP, 71,85 µmol Fe (II) g-1 muestra. En el MTT, para las células el IC50 fue: MIA PaCa-2, 52,51 % (v/v); MRC-5, 41,66 % (v/v); HBMEC, 50,16 % (v/v). En la microscopia de fluorescencia se observó alteraciones en la morfología, desprendimiento y redondeamiento celular; y se confirmó que el EH en concentración de 50 % (v/v) disminuye la proliferación celular en HBMEC y en el tamaño de los núcleos de forma significativa (p< 0,0001), con respecto al control. En FL el rendimiento fue de 3,86 % (m/m). Los AG mayoritarios fueron ácido alfa linolénico (ALA) 3,16 mg g -1 muestra; ácido palmítico, 1,34 mg g -1 muestra; ácido linoleico, 1,18 mg g -1 muestra. El ALA se encontró en el 56,71 % (m/m). En el MTT, para las células el IC50 fue: MIA PaCa-2, 1,045 µg µL-1; MRC-5, 1,123 µg µL-1; HBMEC, 0,472 µg µL-1. En la microscopia de fluorescencia, el efecto antiproliferativo de la FL se verificó en concentraciones de 2,5 y 50,0 µg µL-1 en las tres líneas celulares, siendo significativo para MIA PaCa-2 y MRC5 (p< 0,0001), y no significativo para HBMEC. Los cambios de tamaño observados fueron variables. Los resultados generados en este trabajo muestran los efectos antiproliferativos de las extracciones de A.f en las células utilizadas.

Abstract

Cancer is a complex pathology that affects the patient, their family, society and health system. Cancer has high incidence rates, making it a worldwide problem and although there are treatments, they have side effects. Medicinal plants are a source of low-cost and easily accessible therapeutics. Among them is A. phycoidea (L.) P. Beauv (A.f) or "parrot leaf", abundant in the triple border between Brazil, Argentina and Paraguay, is associated with health benefits in popular knowledge, although no studies have been done to specify its effects. Therefore, this work sought to chemically investigate the compounds of the A.f. leaves, using two extractions: a hydroalcoholic (EH) 70 % (v/v) and a lipid fraction (LF) using chloroform, methanol and water, 2:2:1 (v/v/v); to evaluate their antiproliferative effects and on the cellular structure of cancer cells (MIA PaCa-2), and non-cancerous cells (MRC-5, HBMEC). Analyses of total phenolic compounds, flavonoids and the evaluation of the antioxidant potential of EH were performed. The fatty acid (FA) profile of LF was determined by gas chromatography coupled to mass spectrophotometry (GC-MS). MTT (3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromine) and fluorescence microscopy were used as confirmatory assays for cell proliferation and IC50. The yield of EH was 19.90 % (m/m). The antioxidants were: phenolic compounds 9.04 mg EAG g-1 sample, flavonoids 0.30 mg EQ g1 sample. And the antioxidant capacity in ABTS was 0.395 μmol TE g-1 sample; DPPH, 21.72 μmol TE g-1 sample; and FRAP, 71.85 μmol Fe (II) g-1 sample. In MTT, for cells, the IC50 was: MIA PaCa-2, 52.51 % (v/v); MRC-5, 41.66 % (v/v); HBMEC, 50.16 % (v/v). In fluorescence microscopy, alterations in cell morphology, detachment and rounding were observed; and it was confirmed that EH at a concentration of 50 % (v/v) significantly decreases cell proliferation in HBMEC and in nucleus size (p< 0.0001), compared to control. In FL the yield was 3.86 % (m/m). The majority FA were alpha-linolenic acid (ALA) 3.16 mg g -1 sample; palmitic acid, 1.34 mg g -1 sample; linoleic acid, 1.18 mg g -1 sample. ALA was found in 56.71 % (m/m). In MTT, for cells, IC50 was: MIA PaCa-2, 1.045 μg μL -1 ; MRC-5, 1.123 μg μL -1. ;HBMEC, 0.472 μg μL -1 . In fluorescence microscopy, the antiproliferative effect of LF was verified at concentrations of 2.5 and 50.0 μg μL -1 in the three cell lines, being significant for MIA PaCa-2 and MRC5 (p< 0.0001), and not significant for HBMEC. The size changes observed were variable. The results generated in this work show the antiproliferative effects of the A.f extractions in the cells used.

Descrição

Disertación de maestría presentada al PPG-BC (Programa de Posgraduación en Biociencias), del ILACVN (Instituto Latinoamericano de Ciencias de Vida y de la Naturaleza), de la UNILA (Universidad Federal de la Integración Latinoamericana), como requisito parcial para la obtención del título de Maestría en Biociencias.

Palavras-chave

plantas medicinales, neoplasia, Alternanthera ficoidea (L.) P. Beauv, antioxidantes, ácidos grasos.

Citação

MARTÍNEZ, Johana Esther Regalado. 2024. Estudio de las hojas de Alternanthera ficoidea (L.) P. Beauv y su efecto antitumoral. Asesores: RUIZ, Jorge Luis Maria (asesor); BOROSKI, Marcela (co-asesora). 133 h.. Disertación (Maestría) - PPG-BC (Programa de Postgrado en Biociencias), UNILA (Universidad Federal de la Integración Latinoamericana), Foz de Iguazú.