Avaliação do Lisado de Plasma Rico em Plaquetas Canino como Substituto do Soro Fetal Bovino no Cultivo de Células-Tronco derivadas do Tecido Adiposo Canino
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Data
2021
Autores
Alievi, Anderson Lucas
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Resumo
As células-tronco adultas são notáveis pelo seu potencial no uso clínico em terapias celulares e na engenharia de tecidos humana e veterinária, incluindo em cães. Dentre as células-tronco adultas, as células-tronco derivadas do tecido adiposo (ASCs) apresentam vantagens devido à facilidade de extração, expansão in vitro e a potencial terapêutico. Entretanto, a maioria dos protocolos de expansão das ASCs in vitro envolve a utilização de meio de cultivo suplementado com soro fetal bovino (SFB). O SFB apresenta diversos problemas e sua substituição é desejável, principalmente no cultivo de células para terapias. Nesse contexto, o plasma rico em plaquetas (PRP) tem se mostrado como uma interessante alternativa, havendo, entretanto, poucos estudos, principalmente sobre cultivo de ASCs caninas (cASCs). No presente trabalho foi investigada a viabilidade da utilização do PRP canino como substituto do SFB na suplementação de meio de cultivo no processo de expansão e criopreservação de cASCs. Para isso, foram isoladas as cASCs de uma amostra de tecido adiposo canino e foram avaliados os efeitos e papéis do PRP (comparados à suplementação com SFB) sobre a: proliferação celular e tempo de dobramento celular, expressão de marcadores de membrana típicos de ASCs, expressão de marcadores moleculares relacionados à pluripotência, capacidade de diferenciação adipogênica, condrôgenica e osteogênica e, por fim, buscou-se avaliar o potencial da PRP como componente do meio de criopreservação, avaliando a viabilidade celular após descongelamento das cASCs. Em relação à proliferação celular e o tempo de dobramento, o PRP demonstrou sustentar um crescimento celular semelhante ao SFB, com um tempo de dobramento de 117 ± 24 horas e 103 ± 20 horas, respectivamente. A análise dos marcadores de membrana típicos de ASCs demonstrou que a expansão de cASCs com 10% de PRP não altera a presença de CD73, CD90 e CD105 em relação ao cultivo com 10% de SFB. A capacidade de diferenciação para as três linhagens se manteve igual entre os dois tratamentos. Além disso, o PRP se mostrou como um substituto viável ao SFB na composição de meio de criopreservação após 18 dias de congelamento, não demonstrado diferença estatística na viabilidade celular entre os dois tratamentos. Tais dados apontam que o PRP pode ser uma alternativa viável a utilização do SFB como suplementação no cultivo in vitro de ASCs caninas, demandando, todavia, investigações complementares.
Abstract
Descrição
Trabalho de Conclusão de Curso apresentado ao Instituto Latino-Americano de Ciências da Vida e da Natureza da Universidade Federal da Integração Latino-Americana, como requisito parcial à obtenção do título de Bacharel em Biotecnologia.
Palavras-chave
Células-tronco; Plasma Rico em Plaquetas; Soro Fetal Bovino; Cultivo Celular