Fabichaki, Sabrina Thais2024-11-132024-11-132024FABICHAKI, Sabrina Thais. 2024. Do clássico à inovação em sexagem de aves: sustentabilidade no uso do PCR convencional para novos grupos e busca pela expressão de novo gene sexo-específico com potencial para imunossexagem. Orientadora: GRADE, Carla Vermeulen Carvalho. 138 f. Dissertação (Mestrado) - PPG- BC (Programa de Pós-Graduação em Biociências), UNILA (Universidade Federal da Integração Latino-Americana), Foz do Iguaçu.https://dspace.unila.edu.br/handle/123456789/8675Dissertação de mestrado apresentada ao PPG-BC (Programa de Pós-Graduação em Biociências), do ILACVN (Instituto Latino-Americano de Ciências da Vida e da Natureza), da UNILA (Universidade Federal da Integração Latino-Americana), como requisito parcial à obtenção do título de Mestre em Ciências.O dimorfismo sexual consiste em diferenças morfológicas, fisiológicas ou comportamentais entre fêmeas e machos de indivíduos da mesma espécie. A distinção de indivíduos fêmeas e machos de aves é de extrema importância para diferentes setores da ecologia, ornitologia e conservação. Contudo, o dimorfismo sexual nem sempre é aparente a olho nu e, em algumas espécies de aves, pode ser inexistente. Atualmente, a metodologia mais utilizada para a sexagem no Brasil é através de técnica de PCR, utilizando Primers comerciais, seguida de corrida em gel de agarose. Apesar dessa técnica apresentar resultados positivos com custos relativamente baixos por amostra, é necessária uma equipe técnica especializada, equipamentos e reagentes onerosos. De maneira alternativa, a utilização de anticorpos monoclonais para imunossexagem já é realizada em algumas espécies de mamíferos. Com auxílio de um anticorpo monoclonal específico para o antígeno HY (exclusivo masculino) ligado a fatores de fluorescência, a distinção do cromossomo sexual de gametas pode ser realizada de forma rápida, segura e eficaz. Com a intenção de propor uma metodologia semelhante que pudesse ser utilizada na produção de um kit rápido de sexagem para aves, em trabalho anterior, realizamos um levantamento in silico de proteínas sexo-específica de aves (usando Gallus gallus) presentes na membrana celular de células sanguíneas. Utilizando ferramentas e plataformas de bioinformática, foi identificada uma proteína predita (que chamaremos provisoriamente de proteína SMEFC - "sex-specific marker expressed from the female chromosome”), ainda não caracterizada, proveniente do cromossomo W, com estrutura transmembranar e domínio extracelular preditos. Tal proteína apresenta baixa homologia com outras estruturas proteicas e uma boa conservação entre as espécies de aves. Diante desse cenário, no presente trabalho foi verificada a presença do mRNA da proteína SMEFC em amostras sanguíneas de galinhas, através da metodologia de PCR por transcriptase reversa (RT-PCR). Para isso, utilizaram-se pares de Primers específicos para a sequência de mRNA, desenhados previamente. Apesar de inúmeras tentativas e adaptações, os resultados levantados foram inconclusivos, visto que foi possível observar um anelamento inespecífico em indivíduos machos, impedindo a determinação, dessa forma, de que o mRNA da proteína SMEFC seria sexo-específico. Sendo assim, análises futuras com Primers mais específicos são necessárias. Concomitantemente, foi analisada a funcionalidade da sexagem comercial pelos Primers P0, P2 e P8, em comparação à metodologia mais usada que utiliza apenas o conjunto P2/P8. Foram testadas não somente espécies já sexadas pelo conjunto dos três iniciadores como seis novas espécies não testadas anteriormente, segundo a literatura. Por fim, buscando inovar e agir com sustentabilidade na ciência, foram utilizados kits de extração de DNA viral excedentes do período da Covid, adaptando à utilização na extração de DNA do canhão de penas das nove diferentes espécies sexadas com os Primers P0/P2/P8. O uso do conjunto dos três iniciadores mostrou um excelente desempenho na distinção visual em gel de agarose a 1,5 %, para diferentes espécies pertencentes a distintos grupos, ressaltando a confiabilidade nos resultados da sexagem e a conservação molecular da região CHD, amplificada.viopenAccessavesheterogaméticotranscritopreservaçãogalinha.Thesis