Cruz, Lívia Padilha da2025-03-142025-03-142025https://dspace.unila.edu.br/handle/123456789/8903Trabalho de Conclusão de Curso apresentado ao Instituto Latino-Americano de Ciências da Vida e da Natureza da Universidade Federal da Integração Latino-Americana, como requisito parcial à obtenção do título de Bacharel em Biotecnologia.HSP70 é uma chaperona essencial para a homeostase celular, especialmente sob estresse oxidativo, condição que compromete funções espermáticas críticas. No entanto, seu papel na resposta do espermatozoide ao estresse oxidativo ainda não está totalmente esclarecido. Este estudo investigou a importância da HSP70 na qualidade espermática bovina sob estresse oxidativo. Para isso, espermatozoides coletados da cauda do epidídimo bovino foram lavados, ressuspendidos em TL-STOCK (5x106 espermatozoides/mL) e distribuídos em 4 grupos experimentais. (1) Controle, (2) VER (100 μM do inibidor de HSP70, VER-155008), (3) H2O2 (2% H2O2) e (4) H2O2 + VER (2% H2O2 + 100 μM VER-155008). Em seguida, os espermatozoides foram incubados por 2 horas a 38,5°C, 5% de CO₂ e alta umidade. Após a incubação, os espermatozoides foram processados para avaliação do estresse oxidativo (CellRox Green; 0,76 μM), da atividade mitocondrial (MitoTracker Red CMXRos; 0,76 μM) e da integridade da membrana acrossomal (FITC-PSA; 50 μg/mL) em microscopia de fluorescência. Os dados foram analisados estatisticamente pelo software SigmaPlot 14.0, com ANOVA seguida pelo teste de Tukey (p<0,05). O percentual de espermatozoides positivos para estresse oxidativo foi menor no grupo controle (16,7 ± 3,8%ᵃ) e aumentou progressivamente nos grupos VER (30,9 ± 3,4%ᵃᵇ), H₂O₂ (36,9 ± 4,2%ᵇ) e H₂O₂ + VER (52,7 ± 1,7%ᶜ). A porcentagem de espermatozoides com alta atividade mitocondrial foi significativamente reduzida pela inibição da HSP70 e pelo estresse oxidativo, com 76,3 ± 3,6%ᵃ no controle, 61,6 ± 3,7%ᵇ no VER, 60,3 ± 2,7%ᵇ no H₂O₂ e 46,9 ± 4,9%ᶜ no H₂O₂ + VER. A porcentagem de espermatozoides com a membrana acrossomal íntegra seguiu tendência semelhante, sendo maior no controle (53,0 ± 1,0%ᵃ), comparada ao VER (37,7 ± 0,3%ᵇ), H₂O₂ (36,7 ± 1,9%ᵇ) e ao H₂O₂ + VER (29,7 ± 0,9%ᶜ). Os achados do presente estudo evidenciam o papel central da HSP70 na homeostase espermática, especialmente em condições de estresse oxidativo. A inibição dessa chaperona intensificou significativamente os efeitos deletérios induzidos pelo peróxido de hidrogênio, refletindo-se no aumento da produção de espécies reativas de oxigênio, na disfunção mitocondrial e na perda da integridade. Esses resultados sugerem que a HSP70 exerce uma função citoprotetora nos espermatozoides, possivelmente mediando mecanismos de defesa celular contra o estresse oxidativo. Diante desses achados, conclui-se que a HSP70 não apenas desempenha um papel fundamental na proteção contra o estresse oxidativo, mas também contribui ativamente para a manutenção da qualidade espermática, regulando aspectos críticos como a atividade mitocondrial e a integridade da membrana acrossomal. Resumen HSP70 es una acompañante esencial para la homeostasis celular, especialmente bajo estrés oxidativo, una condición que compromete funciones críticas de los espermatozoides. Sin embargo, aún no se comprende completamente su papel en la respuesta de los espermatozoides al estrés oxidativo. Este estudio investigó la importancia de HSP70 en la calidad de los espermatozoides bovinos bajo estrés oxidativo. Para ello, los espermatozoides recolectados del epidídimo de la cola bovina fueron lavados, resuspendidos en TL-STOCK (5x106 espermatozoides/mL) y distribuidos en 4 grupos experimentales. (1) Control, (2) VER (inhibidor de HSP70 100 µM, VER-155008), (3) H2O2 (2 % H2O2) y (4) H2O2 + VER (2 % H2O2 + 100 µM VER-155008). Luego, los espermatozoides se incubaron durante 2 horas a 38,5°C, 5% de CO₂ y alta humedad. Después de la incubación, los espermatozoides se procesaron para evaluar el estrés oxidativo (CellRox Green; 0,76 μM), la actividad mitocondrial (MitoTracker Red CMXRos; 0,76 μM) y la integridad de la membrana acrosómica (FITC-PSA; 50 μg/mL) mediante microscopía de fluorescencia. Los datos se analizaron estadísticamente mediante el software SigmaPlot 14.0, con ANOVA seguido de la prueba de Tukey (p<0,05). El porcentaje de espermatozoides positivos para estrés oxidativo fue menor en el grupo control (16,7 ± 3,8%ᵃ) y aumentó progresivamente en los grupos VER (30,9 ± 3,4%ᵃᵇ), H₂O₂ (36,9 ± 4,2%ᵇ) y H₂O₂ + VER (52,7 ± 1,7%ᶜ). El porcentaje de espermatozoides con alta actividad mitocondrial se redujo significativamente por la inhibición de HSP70 y el estrés oxidativo, con 76,3 ± 3,6%ᵃ en control, 61,6 ± 3,7%ᵇ en VER, 60,3 ± 2,7%ᵇ en H₂O₂ y 46,9 ± 4,9%ᶜ en H₂O₂ + VER. El porcentaje de espermatozoides con membrana acrosómica intacta siguió una tendencia similar, siendo mayor en el control (53,0 ± 1,0%ᵃ), en comparación con VER (37,7 ± 0,3%ᵇ), H₂O₂ (36,7 ± 1,9%ᵇ) y H₂O₂ + VER (29,7 ± 0,9%ᶜ). Los hallazgos del presente estudio resaltan el papel central de HSP70 en la homeostasis de los espermatozoides, especialmente en condiciones de estrés oxidativo. La inhibición de esta chaperona intensificó significativamente los efectos nocivos inducidos por el peróxido de hidrógeno, reflejados en el aumento de la producción de especies reactivas de oxígeno, disfunción mitocondrial y pérdida de integridad. Estos resultados sugieren que HSP70 ejerce una función citoprotectora en los espermatozoides, posiblemente mediando mecanismos de defensa celular contra el estrés oxidativo. Ante estos hallazgos, se concluye que HSP70 no sólo juega un papel fundamental en la protección contra el estrés oxidativo, sino que también contribuye activamente al mantenimiento de la calidad del esperma, regulando aspectos críticos como la actividad mitocondrial y la integridad de la membrana acrosómica.viopenAccesshomeostaseespermatozóidesbovinosestresse oxidativo