TCC - Biotecnologia
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2024-03-29T01:12:36ZBioprospección de hongos del Parque Nacional do Iguaçu (Brasil) con actividad antitumoral.
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Bioprospección de hongos del Parque Nacional do Iguaçu (Brasil) con actividad antitumoral.
Machado, Jessica Rosmary Romero
El presente trabajo estudió la biodiversidad fúngica del PNI seleccionando hongos aislados del suelo del Parque Nacional do Iguaçu con potencial para producción de compuestos antitumorales para aplicaciones en el campo de la oncología. En el estudio, se utilizaron líneas tumorales derivadas de tumores sólidos de páncreas, empleando células MiaPaca 2, en las que fueron realizadas pruebas de proliferación celular con el fin de determinar la disminución de la viabilidad celular, usando el ensayo de proliferación celular MTT (Bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio) en Medio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM). Los hongos conservados en la Colección de Cultura de Microorganismos de Importancia Biotecnológica y Ambiental (CCMIBA) se cultivaron en medio líquido de Malta al 2% y los extractos obtenidos después del cultivo, se agregaron a cultivos celulares. La viabilidad celular se determinó cuantificando la absorbancia a 492 nm y 630 nm en espectrofotómetro expresados en porcentaje de viabilidad celular. Los resultados mostraron extractos fúngicos capaces de inhibir el crecimiento celular, sin embargo, también extractos fúngicos que aumentaron la proliferación celular, mediante el ensayo de MTT se obtuvo el valor de IC50 para los hongos: Fusarium sp. MD, Fusarium sp. BF, Fusarium sp. IT, Cladosporium sp. EB, Trichoderma sp. KQ, y para los hongos taxonómicamente no identificados: IL, CH, PK, CX y CE. Nuevos estudios están siendo realizados por el grupo para la caracterización taxonómica de los mismos siendo de suma importancia para la continuidad de los estudios. Los hongos estudiados, además de tener potencial para tratamiento tumoral pueden ser utilizados en el ámbito clínico para encontrar biomarcadores, blancos terapéuticos en protocolos de laboratorios y métodos de detección precoz mediante la actividad de aumento de la proliferación celular.
Trabalho de Conclusão de Curso apresentado ao Instituto Latino-Americano de Ciências da Vida e da Natureza da Universidade Federal da Integração Latino-Americana, como requisito parcial à obtenção do título de Bacharel em Biotecnologia.
2021-01-01T00:00:00ZPadronização da amplificação isotérmica mediada por Loop (LAMP) para detecção de Babesia Canis
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Padronização da amplificação isotérmica mediada por Loop (LAMP) para detecção de Babesia Canis
Spinozzi Bicudo, Lia
Hemoparasitoses caninas, endêmicas no Brasil e emergentes globalmente, são de relevante preocupação na medicina veterinária devido à sua alta morbidade e mortalidade em cães. Transmitidas principalmente por carrapatos, especificamente Rhipicephalus sanguineus, essas doenças são potencialmente zoonóticas e podem manifestar-se em áreas urbanas e rurais. Dentre as principais hemoparasitoses no Brasil, pode-se citar a babesiose canina, causada pelo agente do gênero Babesia. Embora muitos cães manifestem sintomas clínicos evidentes, há casos de portadores assintomáticos. Assim, um obstáculo presente é a ausência de um método de diagnóstico ágil, preciso e econômico que permita o tratamento precoce apropriado para os cães, a fim de minimizar as complicações associadas. Portanto, é essencial criar uma técnica de detecção rápida, específica e de custo acessível para esse patógeno. Uma alternativa promissora é a técnica de Amplificação Isotérmica Mediada por Loop (LAMP), que apresenta uma combinação de eficiência, rapidez e custo mais baixo quando comparada à Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) multiplicando o DNA desejado em uma temperatura estável e gerando diversas réplicas. O objetivo deste estudo foi desenvolver e padronizar a técnica LAMP para detectar o protozoário Babesia canis, causador da babesiose canina. Esta doença, comum em muitas regiões do mundo, é caracterizada principalmente pela destruição dos glóbulos vermelhos do hospedeiro, resultando em sintomas como febre, icterícia, anemia e, em alguns casos, manifestações neurológicas. Para isso, amostras de sangue, tecido e cultura provenientes de cães positivados sorologicamente para babesiose tiveram seu DNA extraído e foram realizados testes de padronização, utilizando dois pares de primers (F3, B3, FIP e BIP), variando os parâmetros temperatura, tempo e concentração do reagente betaína. Testaram-se quatro temperaturas (60 °C, 61 °C, 62 °C e 63 °C), sete períodos de incubação (60, 55, 50, 45, 40, 35 e 30 minutos) e sete diferentes concentrações de betaína (0M, 0.4M, 0.6M, 0.8M, 1.2M, 1.4M e 1.6M), utilizando água como controle negativo. A detecção visual do resultado da técnica foi realizada através do uso de 1uL do corante intercalante SYBR Green I por amostra. Os resultados indicaram que a reação foi padronizada de maneira simplificada, na qual o produto foi amplificado a 62°C, com um tempo de incubação de 60 minutos e 1.2M de betaína. O mesmo protocolo foi utilizado no teste de especificidade dos primers, no qual a técnica LAMP mostrou amplificação específica para Babesia canis, sem ocorrência de amplificação cruzada. Assim, o método LAMP revelou-se ágil e descomplicado, sendo excelente para identificar patógenos, como Babesia canis. Sugere-se estudos subsequentes para analisar a sensibilidade do exame.
Trabalho de Conclusão de Curso apresentado ao Instituto Latino-Americano de Ciências da Vida e da Natureza da Universidade Federal da Integração Latino-Americana, como requisito parcial à obtenção do título de Bacharel em Biotecnologia.
2023-01-01T00:00:00ZDesign, assembly, clonagem e preservação de circuitos genéticos paratransgênicos para prevenção da leishmaniose visceral
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Design, assembly, clonagem e preservação de circuitos genéticos paratransgênicos para prevenção da leishmaniose visceral
Braatz, Giulio Mendes
A Leishmaniose visceral canina tem registrado um aumento significativo de casos na região oeste do Paraná nos últimos anos, e os métodos de prevenção atuais mostram-se insuficientes para conter o avanço da doença nessa região e em outras partes do Brasil, devido a desafios de implementação. Diante desse cenário, torna-se imperativo desenvolver e aprimorar novas alternativas que possam desacelerar esse avanço. A paratransgênese surge como uma abordagem promissora ao modificar microrganismos presentes na microbiota do vetor da leishmaniose para que passem a produzir moléculas leishmanicidas. Este estudo foca no potencial da paratransgênese e emprega os princípios da biologia sintética para proporcionar padronização, previsibilidade e modularidade a essa estratégia, ainda pouco explorada em pesquisas sobre o tema. Além disso, destaca-se como a primeira pesquisa da UNILA a adentrar o campo da biologia sintética. O trabalho consiste na construção de quatro circuitos genéticos, seguindo os preceitos da biologia sintética, com o intuito de aplicá-los em estratégias de paratransgênese para o controle efetivo da Leishmaniose Visceral. Este estudo não apenas aborda desafios específicos no contexto da Leishmaniose Visceral, mas também estabelece uma base para futuras pesquisas, proporcionando um arcabouço valioso para a expansão do conhecimento e aprimoramento das estratégias de controle da doença.
Trabalho de Conclusão de Curso apresentado ao Instituto Latino-Americano de Ciências da Vida e da Natureza da Universidade Federal da Integração Latino-Americana, como requisito parcial à obtenção do título de Bacharel em Biotecnologia.
2023-01-01T00:00:00ZEvaluación del Potencial de Biorremediación de Efluentes Industriales por Microorganismos de la Isla Deception, Antártica
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Evaluación del Potencial de Biorremediación de Efluentes Industriales por Microorganismos de la Isla Deception, Antártica
López Colorado, Viviana
La contaminación por efluentes industriales se ha convertido en un problema global
importante que requiere atención inmediata ya que compromete el bienestar de los
ecosistemas y la salud humana. La industria alimentaria es una de las principales
contribuyentes a la contaminación mundial, ya que produce desechos con un alto contenido
orgánico en el medio ambiente. El suero, un subproducto de la producción de queso, a
menudo se desecha y se le conoce como la sustancia más contaminante debido a sus altos
valores de DBO. La industria cervecera también genera residuos, parte de ellos procedente
de la fase de cocción del mosto, colectados y usados para la realización de este estudio.
Para la degradación de dichos compuestos puede hacerse uso de microorganismos, ya
sean nativos de los propios efluentes y/o con otro tipo de origen como los ambientes
extremos y con características únicas. En la Isla Deception (Antártica), existen diversidad
de microorganismos como los psicrófilos (o criófilos) que se modifican para nutrir, replicar
y retener sus actividades metabólicas y prosperan incluso durante los inviernos antárticos.
La alta actividad enzimática a bajas temperaturas implica una característica importante para
el ahorro energético. Así mismo, poseen potenciales enzimas activas en frío con diversos
usos en los sectores comercial y de investigación en biotecnología. Por ello, el objetivo de
este trabajo es evaluar el potencial biotecnológico de microorganismos presentes en
muestras recolectadas de sedimentos marinos en la Isla Decepción en la Antártica para
tolerar y/o degradar material orgánico de efluentes industriales. Se desarrolló la
reactivación de microorganismos conservados y se realizaron pruebas enzimáticas. Se
implementaron distintas etapas, desde la reactivación de los microorganismos antárticos
hasta la evaluación de consorcios en efluentes industriales cerveceros y de suero de leche,
ejecutándose diversos experimentos y técnicas para estudiar extremófilos. Fueron
seleccionadas dos bacterias y un hongo para constituir un consorcio, este último se
evaluará posteriormente para conocer su potencial de tolerancia y/o degradación de
material orgánico presente en muestras industriales colectadas. Fueron caracterizadas
colonias con alta actividad exoenzimática en las pruebas de ‘caseína’ e ‘hidrólisis de
almidón’. En el caso de las proteasas, su producción enzimática indica su utilización en la
degradación de compuestos típicamente proteicos, como sangre y leche; por ello fueron
evaluados consorcios en efluentes provenientes de la industria quesera y del
reaprovechamiento del suero de leche, ambos suministrados por la empresa ‘Sooro
Renner’. Por otra parte, las amilasas descomponen (hidrolizan) el almidón contenido en
diversas muestras, como en las colectadas de la industria ‘277 Craft Beer’, pues la malta
puede contener en torno de 60% de almidón. Fue corroborada la producción de amilasas y
proteasas microbianas con potencial aplicación biotecnológica, principalmente en el área
ambiental, pues se demuestra la sobrevivencia de microorganismos antárticos a diversos
factores, además de la capacidad de degradación de compuestos proteicos y amilolíticos
presentes en efluentes.
Trabalho de Conclusão de Curso apresentado ao Instituto Latino-Americano de Ciências da Vida e da Natureza da Universidade Federal da Integração Latino-Americana, como requisito parcial à obtenção do título de Bacharel em Biotecnologia.
2023-01-01T00:00:00Z